2kb)或taqdna聚合酶基因(25kb),至少需要一年以上的时间,而且要保证每个环节不出现任何失误。
但这对赵长天而言根本不是问题,因为他不需要直接合成基因,而是提取了水生栖热菌zct1(以赵长天名字的首字母命名)的总基因组,然后以基因组为模板,设计引物通过cr得到taqdna聚合酶基因。
所以,a组只需要合成引物就可以了,一条引物只有20b大小,任务大大简化,而可怜的b组,也就是陈怀仁所在的小组,除了他以外,还有张启迪和文红军两个小弟,每天都要苦逼的干活,从早到晚忙碌得像热锅上的蚂蚁。
因为缺乏现成的cr仪,只能用三个水浴锅来进行加热,完成cr的全部过程。
整个试验流程如下,首先三个水浴锅的温度分别设定为94度、55度和72度,然后陈怀仁用大镊子夹住装有基因组模板、引物以及taq酶等试剂的小离心管放到94c的水浴锅中,五分钟后立刻转移到55度的水浴锅中;30秒后再放入到72c的水浴锅中,维持2分钟;接着重新马上把小离心管放入94度30秒,再放入55度30秒,然后72度2分钟……这三个步骤如此反复循环三十五次,最后进行电泳检测。